ELISA natijasi yomonmi?To'g'ri Elisa plastinkasini tanlash uchun bizni kuzatib boring.
Muvofiq Elishay plastinkasini tanlash muvaffaqiyatli Elishay tajribasi uchun birinchi qadamdir, lekin ko'p odamlar buni e'tiborsiz qoldiradilar. Odamlar tajriba o'tkazayotganda, ular ko'pincha tajribaning o'zi haqida o'ylashadi, lekin mahsulot ko'pincha tajribaga katta ta'sir ko'rsatishini bilishmaydi. Mahsulotlarni to'g'ri tanlash tajribaning muvaffaqiyatiga yordam beradi. Elishay tajribalarini o'tkazishda biz odatda quyidagi omillarni hisobga olamiz:
1. Pastki qismning shakli
Hozirgi vaqtda ishlab chiqaruvchilar ferment bilan yorliqli quduqlarni mustaqil ustunlar sifatida loyihalashtirmoqdalar va quduqlar orasidagi masofani mos ravishda oshirib, ularni mustaqil ravishda ajratish va shu bilan o'zaro ifloslanishni minimallashtirish. Elisa plitalarining har xil turlari quduq tubining turli shakllariga ega. Quyida ba'zi umumiy teshiklarning pastki shakllari mavjud:
Yassi pastki: pastki gorizontal, F pastki deb ham ataladi. Yorug'lik pastki qismdan burilmaydi, bu yorug'likni eng katta darajada o'tkazishi mumkin. Ko'rinish yoki boshqa sabablarga ko'ra yumaloq taglikni talab qiladigan tajribalar uchun foydalaning.
Dumaloq pastki: U-pastki sifatida ham tanilgan, eng yaxshi tozalash natijalari va gibrid ish faoliyatini ta'minlaydi, cho'kindilarni sinash kerak bo'lgan ilovalar uchun mos keladi.
C-pastki: tekis taglikning afzalliklarini birlashtirgan holda, tekis pastki va yumaloq pastki o'rtasida yaxshi tozalash effektini ta'minlashi mumkin.
Konusning pastki qismi: V-pastki sifatida ham tanilgan, u kichik hajmlarni optimal tiklash uchun mikro namunalarni aniq namuna olish va saqlash uchun javob beradi.
2. Elisa plastinkasining rangi
Elisa plastinkasining uchta rangi mavjud: shaffof, qora va oq.
Elishayning aksariyat qismi shaffof plitalarni eksperimental materiallar sifatida tanlaydi. Oq va qora Elisa plitalari odatda luminesansni aniqlash uchun ishlatiladi. Qora ELISA plastinkasining o'zi yorug'likni yutadi, shuning uchun uning signali oq ELISA plastinkasidan zaifroqdir. Qora Elisa plitalari odatda floresan aniqlash kabi kuchliroq yorug'likni aniqlash uchun ishlatiladi; aksincha, oq Elisa plitalari zaifroq yorug'likni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin va ko'pincha umumiy xemiluminesans va substrat rangini rivojlantirish uchun ishlatiladi (masalan, dual lusiferaza). muxbir gen tahlili).
3. Elisa plastinkasining materiali
Umumiy materiallar: polietilen (PE), polipropilen (PP), polistirol (PS), polivinilxlorid (PVX) va polikarbonat (PC).
ELSIAda eng ko'p ishlatiladigan materiallar polistirol va polivinilxloriddir. Polivinilxlorid yumshoq taxtasi nozik, kesilishi mumkin va narxi past. Kamchilik shundaki, qoplama polistirol plitasi kabi yaxshi emas va teshikning pastki qismi polistirol kabi tekis emas. Lekin mos keladigan fon qiymati ham ortadi. Odatda, ion payvandlash bilan ishlov berish Elishay plastinkasining yuzasida amalga oshiriladi va substrat yuzasining ish faoliyatini yaxshilash uchun polimer yuzasiga aldegid guruhlari, aminokislotalar va epoksi guruhlari kabi faol funktsional guruhlar kiritiladi.
4. turli xil bog'lash mexanizmlari
Qoplama materialini plastinkaning pastki yuzasiga samarali bog'lash Elishayning hal qiluvchi bosqichidir. Shuning uchun tegishli Elisa plitasini tanlash uchun tajribadan oldin qoplanadigan moddaning strukturaviy xususiyatlari va kimyoviy xossalarini diqqat bilan tahlil qilish kerak. Umuman olganda, qoplama materialini plastinkaning pastki qismiga bog'lashning bir necha yo'li mavjud: passiv adsorbsiya, kovalent bog'lanish va yaqinlikni ushlab turish.
Passiv adsorbsiya: passiv adsorbsiya mexanizmi murakkab bo'lib, qoplama materiali va plastinkaning pastki qismi o'rtasidagi bog'lanish asosan molekulalararo kuchlarga (van der Waals kuchi) va vodorod aloqalariga tayanadi. Ko'pgina ELISAlarda qoplama moddasini plastinkaning pastki qismiga bog'lash passiv adsorbsiya orqali amalga oshiriladi. Odatda, o'rta va katta molekulyar og'irlikdagi antijenler (yoki antikorlar) va plastinkaning pastki qismi o'rtasidagi bog'lanish passiv adsorbsiya orqali amalga oshiriladi. Elisa plitasini tanlashda plitaning pastki yuzasining hidrofobik/hidrofil xususiyatlari ko'pincha hisobga olinadi. Quyidagi jadvalda turli xil gidrofilik substrat yuzalarini qo'llash va foydalanish doirasi keltirilgan:
gidrofil | Prioritet bog'lash | Asosiy foydalanish |
- | Muhim hidrofobik hududlarni o'z ichiga olgan molekulalar, masalan: lipidlar, lipoproteinlar, yirik oqsillar | Antigen ELISA, FlA, LIA |
ortiqcha | Hidrofilik/hidrofobik xususiyatlarga ega biomolekulalar, masalan: o'rta va katta oqsillar, immunoglobulinlar, albuminlar | Ikki tomonlama antikor sendvich ELISA, antigen Elishay |
ortiqcha ortiqcha | Hidrofilik/hidrofobik xususiyatlarga ega biomolekulalar, masalan: kichikdan kattagacha oqsillar, immunoglobulinlar, albumin, LPS, fosforlangan oqsillar, glikoproteinlar | Ikki tomonlama antikor ELISA, FIA, LIA |
ortiqcha ortiqcha ortiqcha | Glikoproteinlar, qutbli lipid molekulalari, fosfolipidlar, kardiolipidlar | Antigen Elishay |
Affinity Capture: Affinity capture yorliqlangan makromolekulalar ularning mos keladigan retseptorlari bilan o'ziga xos bog'lanishiga asoslanadi. Belgilangan makromolekulalar kimyoviy birikma yoki genetik muhandislik yo'li bilan olinishi mumkin.
Affinity Capture xususiyatlari quyidagilardan iborat:
1.yuqori o'ziga xoslik
2.O'lchov natijalarining signal-shovqin nisbatini yaxshilash mumkin
Ko'proq keng tarqalgan quduq pastki yuzalar: streptavidin (streptavidin) bilan qoplangan sirt; nikel xelat (Nikel Chelate) bilan qoplangan sirt va glutation (Glutation, GSH) bilan qoplangan sirt.
3. Streptavidin yuzasi: streptavidin va biotinning yuqori yaqinligi va o'ziga xosligi pastki plastinkaning qoplangan oqsil bilan bog'lanishini amalga oshirish uchun ishlatiladi.
4. Nikel xelat yuzasi: Nikel xelat polimer yuzasiga termoyadroviy oqsillarni His (histidin) teglari bilan bog'lash uchun biriktiriladi.
5. Glutation yuzasi: Pastki plastinkaning qoplama oqsiliga bog'lanishiga erishish uchun glutation va glutation sulfhidriltransferaza (GST) o'rtasida ferment va substrat o'ziga xosligidan foydalanish.
Nima uchun BKMAM Elisa plitasini tanlaysiz?
100 foiz polistiroldan tayyorlangan,
Yopishqoq hujayra madaniyati uchun javob beradi,
Yassi tayanch, hatto qalinligi va reaksiya qutblari uchun bir xil o'lcham,
Individual paketli steril,
Zavod narxi bilan yuqori sifat.
